純生啤酒可最大限度地保證啤酒的鮮度，但是如何使生產(chǎn)出的純生啤酒具有良好的生物穩(wěn)定性、泡沫穩(wěn)定性，是保證純生啤酒口味及質(zhì)量的關(guān)鍵。

    一、 啤酒中蛋白質(zhì)分解酶A的意義

    啤酒酵母在主酵、后熟和貯酒期間會分泌一種蛋白質(zhì)分解酶A，這種酶是天冬氨酸——外肽酶，活化態(tài)分子量為44kDa，前驅(qū)體——蛋白質(zhì)的分子量為55kDa。蛋白質(zhì)分解酶A位于酵母細(xì)胞中的液泡，屬于胞內(nèi)蛋白質(zhì)分解酶，有利于細(xì)胞內(nèi)肽的分解和含氮物質(zhì)代謝。由于蛋白質(zhì)分解酶A的最適PH在3.0-5.0，所以中啤酒中呈活化狀態(tài)。如果啤酒采取巴氏殺菌，則啤酒中不含有這種蛋白分解酶A，對啤酒泡沫不構(gòu)成影響。純生啤酒因低溫過濾除菌還含有這種蛋白酶分解酶A，所以影響啤酒泡沫穩(wěn)定性。

    蛋白質(zhì)分解酶A與啤酒泡沫穩(wěn)定性的關(guān)系：啤酒在30℃保持8周，各自含有的0-70×10-5EH/ml范圍內(nèi)不同的蛋白質(zhì)分解酶A的活性。實(shí)踐結(jié)果表明，蛋白質(zhì)分解酶A的活力越強(qiáng)，啤酒泡沫穩(wěn)定性差，同時啤酒中泡沫蛋白質(zhì)的分解還取決于時間和貯存溫度。

    采用SH分析蛋白分解情況：兩種啤酒在30℃保持16周以上，蛋白質(zhì)分解酶活性分別為6×10-5EH/ml×和75×10-5EH/ml。實(shí)驗結(jié)果表明，能使啤酒中40kDa和25kDa的蛋白質(zhì)分解，并且蛋白質(zhì)分解酶A活力越強(qiáng)，泡沫蛋白質(zhì)分解就越強(qiáng)烈。

    二、 測定啤酒中蛋白質(zhì)分解酶A的方法

    目前已能采用熒光物質(zhì)測定蛋白質(zhì)分解酶A的活力，同時從多個合成的肽中選擇能被酶分解的敏感肽鏈。與傳統(tǒng)介質(zhì)A和B相比，這種肽介質(zhì)具有最高的動力學(xué)常數(shù)3040kcat/km，能準(zhǔn)確、快速測定蛋白質(zhì)分解酶A的活力大小，在啤酒中誤差極限為1.0×10-6EH/ml。

    采用這種新的肽介質(zhì)，對從不同國家中選擇14種啤酒進(jìn)行蛋白質(zhì)分解酶A活力的測定，蛋白質(zhì)分解酶的活力在0.3-26×10-6EH/ml，因涉及到最新鮮的啤酒，所以酶的活力能準(zhǔn)確確定。其中一種啤酒因高溫短時殺菌，啤酒中基本不含有蛋白質(zhì)分解酶A。

    為了能控制啤酒中蛋白質(zhì)分解酶A的活力大小，必須要研究發(fā)酵過程中這種酶的分泌、變化過程，在酵母吸必收營養(yǎng)物質(zhì)如碳水化合物和可同化氮之后，發(fā)酵液中蛋白質(zhì)分解酶的活力上升，并且不會隨酵母中死亡率增加呈比例上升，因此蛋白質(zhì)分解酶A不僅僅由自溶的酵母分泌，而主要由活酵母分泌。要使純生瓶裝啤酒中蛋白質(zhì)分解酶A保持盡可能低，在發(fā)酵時避免蛋白質(zhì)分解酶A的分泌具有重要意義。

    為了能在釀造過程中控制蛋白質(zhì)分解酶A的活性，必須研究酵母回收條件對酵母活性、發(fā)酵力和酵母分泌蛋白質(zhì)分解酶A的活性。

    假定在進(jìn)行主酵（殘?zhí)遣蛔兓�）之后發(fā)酵液中懸浮酵母為A，沉降的酵母為C；在還原雙乙酰之后懸浮的酵母為B，沉降的酵母為D0所有回收的酵母A、B、C、D的發(fā)酵力和分泌的蛋白質(zhì)分解酶A的 活力較早回收的酵母與較晚回收的酵母相比具有較低的蛋白質(zhì)分解酶A 的分泌能力。懸浮的酵母分泌蛋白質(zhì)分解酶A 的能力比沉降的酵母要小，所以生產(chǎn)純生啤酒有必要較早回收酵母，且使沉降的酵母與發(fā)酵液分離。即避免錐形大罐保存酵母泥。

    同時較早回收的酵母其繁殖能力和發(fā)酵力要比較遲回收的酵母強(qiáng)，酵母回收越早（必須徹底發(fā)酵）啤酒質(zhì)量反而越好。

    通過對純生瓶裝啤酒中蛋白質(zhì)分解酶活力與啤酒泡持性、泡沫穩(wěn)定性及口味品評來看，在徹底發(fā)酵之后，回收懸浮的酵母其活力最強(qiáng)，酵母分泌蛋白質(zhì)分解酶A的能力最低，有利于提高純生瓶裝啤酒的泡沫穩(wěn)定性。