一、用途

艱難梭狀芽孢桿菌乳膠凝集檢測(cè)試劑用于確證鑒定從假膜性結(jié)腸炎、與抗生素有關(guān)的腹瀉和手術(shù)后腹瀉病人的糞便樣品中分離出的艱難梭狀芽孢桿菌可疑菌落。該試劑盒僅供專業(yè)人員使用。

二、原理

乳膠顆粒表面包被與艱難梭狀芽孢桿菌細(xì)胞壁抗原具有特異性的兔免疫球蛋白抗體。當(dāng)敏化的乳膠顆粒與艱難梭狀芽孢桿菌菌懸液混合后，敏感而特異的免疫化學(xué)反應(yīng)可使乳膠顆粒迅速形成肉眼可見的凝集。

三、試劑盒組成成分

REAG TEST 測(cè)試試劑　M41a 艱難梭狀芽孢桿菌乳膠試劑　2.5mL

乳膠顆粒包被與艱難梭狀芽孢桿菌抗原具有特異性的兔免疫球蛋白。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（藍(lán)色瓶蓋）

CONTROL +  陽(yáng)性對(duì)照試劑　M41b　陽(yáng)性對(duì)照　　0.5mL

不具活性的艱難梭狀芽孢桿菌抗原，用于與測(cè)試試劑反應(yīng)。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（黑色瓶蓋）

NaCl 0.85%  0.85%鹽水　M40　0.85%生理鹽水　5.0mL

含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（白色瓶蓋）

使用說(shuō)明書

檢測(cè)板

攪拌棒

需要的其它材料

l         接種環(huán)

l         梭狀芽孢桿菌的選擇性分離平板（CCFA或CCEY）

四、警告和注意事項(xiàng)

安全：

1、試劑僅供體外診斷使用。

2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物�？捎么罅克疀_洗以避免疊氮化物的堆積。

3、在處理或檢測(cè)可疑致病菌時(shí)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應(yīng)作中和處理。

4、陽(yáng)性對(duì)照液在生產(chǎn)中已作惰性處理，但仍應(yīng)遵循潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序。

檢測(cè)過程：

1、試劑盒應(yīng)按說(shuō)明書使用。

2、所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。

3、不要稀釋試劑盒內(nèi)的任何試劑

4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。

5、不要冷凍試劑盒內(nèi)的試劑。

6、不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到陽(yáng)性對(duì)照試劑或細(xì)菌樣品。

7、使用前應(yīng)確保檢測(cè)板清潔干燥。

8、如果陽(yáng)性對(duì)照不發(fā)生凝集或乳膠試劑在生理鹽水中自凝，說(shuō)明試劑已無(wú)效。應(yīng)使用新的試劑盒。

五、貯存及保質(zhì)期

檢測(cè)試劑盒不使用時(shí)應(yīng)貯存在2～8℃，并應(yīng)在包裝盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用檢測(cè)試劑。

六、樣本

糞便樣品應(yīng)接種于增菌肉湯中在37℃培養(yǎng)18～24小時(shí)后，然后在選擇性平板（CCFA或CCEY）上培養(yǎng)增菌液。平板應(yīng)在厭氧環(huán)境中37℃培養(yǎng)24～48小時(shí)。

挑取選擇性分離平板上的艱難梭狀芽孢桿菌可疑菌落，用該試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。（程序如下）

七、檢測(cè)過程

質(zhì)量控制：

在每次使用檢測(cè)試劑盒前應(yīng)作下列質(zhì)量控制檢測(cè)，以確證試劑的有效性。

1、檢測(cè)試劑的控制：滴加1滴生理鹽水(M40)于一個(gè)測(cè)試反應(yīng)環(huán)內(nèi)，然后在同一反應(yīng)環(huán)內(nèi)滴1滴測(cè)試試劑(M41a)，再用攪拌棒在整個(gè)區(qū)域內(nèi)混勻液體，并觀察是否會(huì)出現(xiàn)凝集。應(yīng)無(wú)凝集發(fā)生。如果出現(xiàn)凝集反應(yīng)，表明檢測(cè)試劑或生理鹽水受到污染，應(yīng)廢棄處理。

2、陽(yáng)性對(duì)照的控制：輕輕搖勻陽(yáng)性對(duì)照試劑(M41a)，并滴1滴于測(cè)試反應(yīng)環(huán)內(nèi)，然后滴1滴測(cè)試試劑(M41a)于同一個(gè)測(cè)試反應(yīng)環(huán)內(nèi)，再用攪拌棒混勻液體， 2分鐘并觀察凝集。如果未出現(xiàn)凝集反應(yīng)，則應(yīng)廢棄該檢測(cè)試劑盒。

測(cè)試程序：

1、滴1滴生理鹽水(M40)于潔凈的檢測(cè)板上的一個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

2、用接種環(huán)從選擇性分離平板上挑取可疑菌落，與反應(yīng)環(huán)內(nèi)的生理鹽水混合，形成均勻的菌懸液。

3、觀察菌懸液是否會(huì)出現(xiàn)自動(dòng)凝集現(xiàn)象。如果出現(xiàn)自凝現(xiàn)象，即不可用乳膠試劑檢測(cè)該菌株。應(yīng)選用其它的檢測(cè)方法。如果沒有出現(xiàn)凝集，進(jìn)行下一步測(cè)試。

4、輕輕搖勻乳膠測(cè)試試劑后，滴1滴至反應(yīng)環(huán)內(nèi)的菌懸液中，不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到菌懸液。

5、用1支干凈的攪拌棒混合菌懸液和測(cè)試試劑約30秒，然后輕搖檢測(cè)板。

6、在2分鐘內(nèi)觀察凝集結(jié)果。

7、記錄結(jié)果后，將攪拌棒和檢測(cè)板進(jìn)行適當(dāng)?shù)南�毒處理�?/span>

八、結(jié)果說(shuō)明

在2分鐘內(nèi)出現(xiàn)凝集，表明樣品中有艱難梭狀芽孢桿菌，如不出現(xiàn)凝集，表明測(cè)試菌落中無(wú)艱難梭狀芽孢桿菌。

九、使用的局限性

1、結(jié)果應(yīng)依據(jù)所有的臨床和實(shí)驗(yàn)室信息進(jìn)行判斷。分離出艱難梭狀芽孢桿菌不能確診假膜性結(jié)腸炎或抗生素性腹瀉。

2、使用乳膠試劑檢測(cè)艱難梭狀芽孢桿菌時(shí)應(yīng)選取選擇性平板上可疑菌落，以提高分離率。

3、其它的梭狀芽孢桿菌偶爾也可在CCFA平板上生長(zhǎng)，但它們?cè)?/span>CCEY平板上的菌落形態(tài)與艱難梭狀芽孢桿菌不同，或不生長(zhǎng)。

4、分離出的可疑艱難梭狀芽孢桿菌發(fā)生自凝現(xiàn)象時(shí)，不可采用乳膠試劑檢測(cè)，應(yīng)選用其它方法檢測(cè)。

十、檢測(cè)效果對(duì)比

在一個(gè)獨(dú)立的英國(guó)微生物實(shí)驗(yàn)室和和公司內(nèi)部均分別對(duì)Microscreen 艱難梭狀芽孢桿菌乳膠試劑盒與一種已廣泛使用的商業(yè)化的乳膠試劑盒做了測(cè)試效果對(duì)比。用二種商品共檢測(cè)137株在選擇性平板上生長(zhǎng)的菌落。

靈敏度　185/85＝100%

特異性　52/52＝100%

一致性　137/137＝100%

^＊檢測(cè)樣品中分離出的85株，其中18株在二種試劑盒中均存在交叉反應(yīng)，但其中的16株不會(huì)在艱難梭狀芽孢桿菌的選擇性平板中生長(zhǎng)或其生長(zhǎng)時(shí)菌落形態(tài)與艱難梭狀芽孢桿菌不同。另外2株（均為C.glycolicum）在其平板上可弱生長(zhǎng)，但菌落不具有大多數(shù)艱難梭狀芽孢桿菌所特有的熒光。

^＊＊其中有2株艱難梭狀芽孢桿菌（血清型A9、A10）。其中1株（A10）顯示出輕微異常的菌落形態(tài)，其余的50株包括不同種的細(xì)菌，其中5株為梭狀芽孢桿菌屬。大部分單個(gè)菌落不會(huì)在艱難梭狀芽孢桿菌的選擇性平板上生長(zhǎng)　或生長(zhǎng)時(shí)顯示出非典型的可疑菌落。

測(cè)試結(jié)果顯示Microscreen乳膠凝集檢測(cè)試劑盒與這種已廣泛使用的商業(yè)化的乳膠試劑盒檢測(cè)效果相當(dāng)。盡管少量菌株在2種試劑盒中均存在假陽(yáng)性結(jié)果，但在艱難梭狀芽孢桿菌的選擇性平板上，不會(huì)生長(zhǎng)或菌落形態(tài)不同�！�

  總的來(lái)說(shuō)，用Microscreen艱難梭菌乳膠凝集檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果與所對(duì)比的另一商業(yè)化產(chǎn)品結(jié)果一致。

十一、重復(fù)性

批內(nèi)重復(fù)性：通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對(duì)照抗原及一組質(zhì)控菌株對(duì)同1批產(chǎn)品的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測(cè)。由不同的操作者隨機(jī)測(cè)試3次，3個(gè)操作者間分析結(jié)果無(wú)顯著差異。