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什么是基因芯片

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06

生物芯片,簡(jiǎn)單地說(shuō)就是在一塊指甲大。1cm3)的有多聚賴氨酸包被的硅片上或其它固相支持物(如玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纖維素膜、尼龍膜等,但需經(jīng)特殊處理。作原位合成的支持物在聚合反應(yīng)前要先使其表面衍生出羥基或氨基(視所要固定的分子為核酸或寡肽而定)并與保護(hù)基建立共價(jià)連接;作點(diǎn)樣用的支持物為使其表面帶上正電荷以吸附帶負(fù)電荷的探針?lè)肿,通常需包被以氨基硅烷或多聚賴氨酸等)將生物分子探針(寡核苷酸片段或基因片段)以大?guī)模陣列的形式排布,形成可與目的分子(如基因)相互作用,交行反應(yīng)的固相表面,在激光的順序激發(fā)下標(biāo)記熒光根據(jù)實(shí)際反應(yīng)情況分別呈現(xiàn)不同的熒光發(fā)射譜征,CCD相機(jī)或激光共聚焦顯微鏡根據(jù)其波長(zhǎng)及波幅特征收集信號(hào),作出比較和檢測(cè),從而迅速得出所要的信息。生物芯片包括基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、組織芯片。而基因芯片中,最成功的是DNA芯片,即將無(wú)數(shù)預(yù)先設(shè)計(jì)好的寡核苷酸或cDNA在芯片上做成點(diǎn)陣,與樣品中同源核酸分子雜交[3]的芯片。

基因芯片的基本原理同芯片技術(shù)中雜交測(cè)序(sequencing by hybridization, SBH)。即任何線狀的單鏈DNA或RNA序列均可被分解為一個(gè)序列固定、錯(cuò)落而重疊的寡核苷酸,又稱亞序列(subsequence)。例如可把寡核苷酸序列TTAGCTCATATG分解成5個(gè)8 nt亞序列:
  (1)     CTCATATG
  (2)     GCTCATAT
  (3)    AGCTCATA
  (4)    TAGCTCAT
  (5)   TTAGCTCA
  這5個(gè)亞序列依次錯(cuò)開(kāi)一個(gè)堿基而重疊7個(gè)堿基。亞序列中A、T、C、G 4個(gè)堿基自由組合而形成的所有可能的序列共有65536種。假如只考慮完全互補(bǔ)的雜交,那么48個(gè)8 nt亞序列探針中,僅有上述5個(gè)能同靶DNA雜交?梢杂萌斯ず铣傻囊阎蛄械乃锌赡艿膎體寡核苷酸探針與一個(gè)未知的熒光標(biāo)記DNA/RNA序列雜交,通過(guò)對(duì)雜交熒光信號(hào)檢測(cè),檢出所有能與靶DNA雜交的寡核苷酸,從而推出靶DNA中的所有8 nt亞序列,最后由計(jì)算機(jī)對(duì)大量熒光信號(hào)的譜型(pattern)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,重構(gòu)靶DNA 的互補(bǔ)寡核苷酸序列。


 
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