雜交膜是一種多孔、表面積很大的固相載體,核酸一旦固定在上面,就可用雜交法進行檢測。最常使用的膜是硝酸纖維素膜,用于放射性和非放射笥標記探針都很方便,產(chǎn)生的本底淺,與核酸結(jié)合的化學性質(zhì)不是很清楚,推測為非共價鍵結(jié)合。經(jīng)80℃烤干2h和雜交處理后,核酸仍不會脫落。硝酸纖維素膜的另一特點是只與蛋白有微弱非特異結(jié)合,這在使用非同位素探針中尤為有用。硝酸纖維素膜的缺點是結(jié)合核酸能力的大小取決于轉(zhuǎn)印條件和高濃度鹽(>10×SSC),與小片段核酸(<200bp)結(jié)合不牢,質(zhì)地脆,不易操作。
尼龍膜在某些方面比硝酸纖維素膜好,它的強度大、耐用,可與小至10bp的片段共價結(jié)合。在低離子濃度緩沖液等多種條件下,它們都可與DNA單鏈或RNA緊密結(jié)合,且多數(shù)膜不需燒烤。尼龍膜韌性好,可反復處理與雜交,而不丟失被檢標本。它通過疏水鍵和離子鍵與核酸結(jié)合,結(jié)合力為350~500μg/cm2,比硝酸纖維素膜(80~100μg/cm2)強許多。尼龍膜的缺點是對蛋白有高親合力,不宜使用非同位素探針。