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核酸分子雜交探針的濃度和標(biāo)記方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06

  總的來(lái)說(shuō),隨探針濃度增加,雜交率也增加。另外,在較窄的范圍內(nèi),隨探針濃度增加,敏感性增加。依我們的經(jīng)驗(yàn),要獲得較滿意的敏感性,膜雜交中32P標(biāo)記探針與非放射性標(biāo)記探針的用量分別為5~10ng/ml和25~1000ng/ml,而原位雜交中,無(wú)論應(yīng)用何種標(biāo)記探針,其用量均為0.5~5.0μg/ml。探針的任何內(nèi)在物理特性均不影響其使用濃度,但受不同類型標(biāo)記物的固相支持物的非特異結(jié)合特性的影響。

  在選擇探針類型的同時(shí),還需要選擇標(biāo)記方法。探針的標(biāo)記方法很多,選擇什么標(biāo)記方法主要視個(gè)人的習(xí)慣和可利用條件而定。但在選擇標(biāo)記方法時(shí),還應(yīng)考慮實(shí)驗(yàn)的要求,如靈敏度和顯示方法等。一般認(rèn)為放射性探針比非放射性探針的靈敏度高。放射性探針的實(shí)際靈敏度不依賴于所采用的標(biāo)記方法,如隨機(jī)引物延伸法往往得到比缺口平移法更高的比活性。在檢測(cè)單拷貝基因序列時(shí),應(yīng)選用標(biāo)記效率高、顯示靈敏的探針標(biāo)記方法。在對(duì)靈敏要求不高時(shí),可采用保存時(shí)間長(zhǎng)的生物素探針技術(shù)和比較穩(wěn)定的堿性磷酸酶顯示系統(tǒng)。


 
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