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化學(xué)切割錯(cuò)配法(chemical cleavage of mismatch,CCM)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01
CCM為在Maxam-Gilbert測(cè)序法的基礎(chǔ)上發(fā)展的一項(xiàng)檢測(cè)突變的技術(shù),其檢測(cè)突變的準(zhǔn)確性可與DNA測(cè)序相仿。其基本原理為將待測(cè)含DNA片段與相應(yīng)的野生型DNA片段或DNA和RNA片段混俁變性雜交,在異源雜合的雙鏈核酸分子中,錯(cuò)配的C能被羥胺或哌啶切割,錯(cuò)配的T能被四氧化餓切割,經(jīng)變性凝膠電泳即可確定是否存在突變。該法檢出率很高,也是檢片段最長(zhǎng)的方法,已有報(bào)功檢測(cè)了1.7kb片段,如果同時(shí)對(duì)正、反義鏈進(jìn)行分析,檢出率可達(dá)100%。應(yīng)用熒光檢測(cè)系統(tǒng)可增強(qiáng)敏感度,可檢測(cè)到10個(gè)細(xì)胞中的1個(gè)突變細(xì)胞。該法中的化學(xué)試劑有毒,又發(fā)展了碳二亞胺檢測(cè)法(catodiimide,CDI),CDI為無(wú)毒物質(zhì),也可檢測(cè)大片段DNA的點(diǎn)突變。
 
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