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變性梯度凝膠電泳法(denaturing gradinent electrophoresis,DGG

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01
DGGE法分析PCR產(chǎn)物,如果突變發(fā)生在最先解鏈的DNA區(qū)域,檢出率可達(dá)100%,檢測(cè)片段可達(dá)1kb,最適圍為100bp-500bp。基本原理基于當(dāng)雙鏈DNA在變性梯度凝膠中進(jìn)行到與DNA變性濕度一致的凝膠位置時(shí),DNA發(fā)生部分解鏈,電泳適移率下降,當(dāng)解鏈的DNA鏈中有一個(gè)堿基改變時(shí),會(huì)在不同的時(shí)間發(fā)生解鏈,因影響電泳速度變化的程而被分離。由于本法是利用溫度和梯度凝膠遷移率來(lái)檢測(cè),需要一套專用的電泳裝置,合成的PCR引物最好在5`末端加一段40bp-50bp的GC夾,以利于檢測(cè)發(fā)生于高熔點(diǎn)區(qū)的突變。在DGGE的基礎(chǔ)上,又發(fā)展了用濕度梯度代替化學(xué)變性劑的TGGE法(溫度梯度凝膠電泳temperature gradient gelelectrophoresis,TGGE)。DGGE和TGGE均有商品化的電泳裝置,該法一經(jīng)建立,操作也較簡(jiǎn)便,適合于大樣本的檢測(cè)篩選。
 
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