原理

在pH8.6的瓊脂凝膠中，抗體球蛋白只帶有微弱的負(fù)電荷，在電泳時(shí)，由于電滲作用的影響，抗體球蛋白不但不能抵抗電滲作用向正極移動(dòng)，反而向負(fù)極倒退。而一般抗原蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，將抗原置于負(fù)極，將血清抗體置于正極，電泳后則在兩孔之間相遇，并在比例適當(dāng)?shù)牟课恍纬扇庋劭梢姷某恋砭�。

本法由于抗原抗體分子在電場作用下定向運(yùn)動(dòng)，限制了自由擴(kuò)散，增加了相應(yīng)作用的抗原抗體的濃度，從而提高了敏感性，它較瓊脂擴(kuò)散敏感性高10～16倍。本法快速、操作簡單。

試劑

同免疫電泳。

操作方法

1．制瓊脂板 以pH8.6離子強(qiáng)度0.05巴比妥緩沖液配成1%～1.5％瓊脂凝膠板，厚度2mm～3mm。

2．打孔 瓊脂冷卻后，按圖打孔，打成對(duì)的小孔數(shù)列，孔徑0.3cm～0.6cm，孔距0.4cm～1.0cm。挑去孔內(nèi)瓊脂，封底。

3．加樣 一對(duì)孔中，一孔加已知（或待測）抗原，另一孔加待測（或已知）抗體。

4．電泳 將抗原孔置于負(fù)極端。電壓2.5V／cm～6V／cm，或電流強(qiáng)度3mA/cm～5mA/cm，電泳時(shí)間30min～90min。

觀察結(jié)果

斷電后，將玻板置于燈光下，襯以黑色背景觀察。陽性者則在抗原抗體孔之間形成一條清楚致密的白色沉淀線。如沉淀線不清晰，可把瓊脂板放在濕盒中37℃數(shù)小時(shí)或置電泳槽過夜再觀察。

注意事項(xiàng)

1．抗原抗體濃度的比例 當(dāng)抗原抗體比例不適合時(shí)，均不能出現(xiàn)明顯可見的沉淀線。所以除了應(yīng)用高效價(jià)的血清外，每份待測樣品均可做幾個(gè)不同的稀釋度來進(jìn)行檢查。

2．特異性對(duì)照鑒定 為了排除假陽性反應(yīng)，則在待檢抗原孔的鄰近并列一陽性抗原孔，若待檢樣品中的抗原與抗體所形成的沉淀線和陽性抗原抗體沉淀線完全融合時(shí)，則待檢樣品中所含的抗原為特異性抗原。

3．適當(dāng)?shù)碾姖B作用在對(duì)流免疫電泳中是必要的。當(dāng)瓊脂質(zhì)量差時(shí)，電滲作用太大，而使血清中的其它蛋白成分也泳向負(fù)極，造成非特異性反應(yīng)。在某些情況，瓊脂糖由于缺乏電滲作用而不能用于對(duì)流免疫電泳。

4．當(dāng)抗原抗體在同一介質(zhì)中帶同樣電荷或遷徙相近時(shí)，則電泳時(shí)兩者向著一個(gè)方向泳動(dòng)。故不能用對(duì)流免疫電泳來檢查。