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人類淋巴母細(xì)胞建株要點(diǎn)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
l、4ml肝素抗凝血于離心管中,加入2ml RPMI 1640。
2、混勻后沿管壁緩慢加到預(yù)置有4ml淋巴細(xì)胞分離液的液面上靜置30min。
3、1500rpm,15min,吸取白細(xì)胞層(第二層)于另一離心管中。
4、加RPMI 1640 5ml洗滌白細(xì)胞兩次。
5、將白細(xì)胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中,加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EBV(EB病毒)液,混勻。
6、水浴搖床,40次/分,37℃,3hr。
7、1500rpm,15min。將細(xì)胞接種至1ml培養(yǎng)基中(內(nèi)含谷氨酰胺1mM/ml)加入10μl環(huán)胞霉素,輕輕混勻,37℃培養(yǎng)。
8、5天后觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)化和生長(zhǎng)情況,決定是否半量換液。一般半量換液l—2次,并維持環(huán)胞霉素的濃度。
9、待轉(zhuǎn)化細(xì)胞數(shù)量明顯上升,并出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)塊后,可轉(zhuǎn)入25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,加1—2ml培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)10—15天,一般每隔3—4天觀察一次,決定是否換液,傳代。
10、細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)一定數(shù)量后凍存,凍存前應(yīng)進(jìn)行核型分析和存檔。
 
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