GBT 16294-2010 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測(cè)試方法

GB 15979-2002 一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

2.1 配制藥品：生理鹽水（試管中+棉簽）或直接采購(gòu)無(wú)菌涂抹棒、PCA、VRBA

2.2 培養(yǎng)基滅菌：PCA------121℃，15分鐘；VRBA------無(wú)需滅菌，煮沸即可，生理鹽水------121℃，15分鐘

注：滅菌后的生理鹽水需冷卻徹底后才可以進(jìn)行涂抹操作

2.3 涂抹操作：

2.3.1 取待測(cè)物（人員手部、操作案板、工器具表面等）涂抹面積為5*5cm2；

2.3.2 涂抹后將與手部接觸的棉簽棒的部分折掉；

2.3.3 檢樣作出2~3個(gè)稀釋度：

1mL（原液）

→無(wú)菌平皿中（10-1），2板菌落，2板大腸=4板

→9mL滅菌生理鹽水中（10-2），2板菌落，2板大腸=4板

→于10-2試管中吸取1mL，加入9mL滅菌生理鹽水中（10-3），2板菌落，2板大腸=4板

注：菌落倒入配置后滅菌的PCA，15~20mL，大腸倒入配制后滅菌的VRBA，15~20mL

2.3.4 培養(yǎng)：待瓊脂凝固后放入培養(yǎng)箱中，平皿倒置（除霉菌PDA外，其余平皿均倒置培養(yǎng)），36±1℃，大腸培養(yǎng)24小時(shí)，菌落培養(yǎng)48小時(shí)。

2.3.5 查板計(jì)數(shù)：于N+1天，查大腸結(jié)果，N+2天，查菌落結(jié)果。

3.1 配制培養(yǎng)基：PCA、PDA；

3.2 倒板：按照計(jì)劃沉降點(diǎn)數(shù)，計(jì)算所需培養(yǎng)基及倒板的數(shù)量，PCA約20mL/板，PDA不得少于20mL/板（培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，瓊脂少就干巴了）；

3.3 沉降：車間在30m²以上者，于東、西、南、北（距墻1m處）、中五點(diǎn)；小于30m²者，于一條對(duì)角線里、中、外三點(diǎn)，高度均在1.5m處采樣，打開(kāi)平皿蓋，使平板在空氣中暴露5 min（操作時(shí)，周圍不得有人員走動(dòng)，防止結(jié)果不準(zhǔn)）；

3.4 收板：將手部用75%酒精消毒后再收板，切忌觸碰到平板內(nèi)瓊脂

3.5 培養(yǎng)：PCA,36±1℃,培養(yǎng)48小時(shí);PDA,28℃,培養(yǎng)5天；

3.6 查板計(jì)數(shù)：于N+2天，查菌落結(jié)果，N+5天，查霉菌結(jié)果。