一、目的:
本規(guī)程旨在為微生物實(shí)驗(yàn)室操作提供一個標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程;
二、適用范圍:
微生物實(shí)驗(yàn)室;
三、責(zé)任人:
實(shí)驗(yàn)室、微生物檢測員;
四、安全注意事項(xiàng):
嚴(yán)格遵循無菌操作,防止微生物污染;操作人員進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈。
五、微生物實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程:
1.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)有無菌操作間和緩沖間,無菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到10000級,室內(nèi)溫度保持在20~24℃,濕度保持在45~60%,超凈臺潔凈度應(yīng)達(dá)到100級。
2.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持清潔,嚴(yán)禁堆放雜物,以防污染。
3.嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染,已污染者應(yīng)停止使用。
4.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有工作濃度的消毒液(75%的酒精)。
5.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔,以保證微生物實(shí)驗(yàn)室的潔凈度符合要求。
6.需要帶入微生物實(shí)驗(yàn)室使用的儀器,器械,平皿等一切物品,均應(yīng)包扎嚴(yán)密,并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌。
7.工作人員進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室前,必須用肥皂或消毒液洗手消毒,然后在緩沖間更換專用工作服,鞋,帽子,口罩和手套(用75%的乙醇再次擦拭雙手),方可進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行操作。
8.微生物實(shí)驗(yàn)室使用前必須打開微生物實(shí)驗(yàn)室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上,并且同時(shí)打開超凈臺進(jìn)行吹風(fēng)。操作完畢,應(yīng)及時(shí)清理微生物實(shí)驗(yàn)室,再用紫外燈輻照滅菌30分鐘。
9.供試品在檢查前,應(yīng)保持外包裝完整,不得開啟,以防污染。檢查前,用75%的酒精棉球消毒外表面。
10.每次操作過程中,均應(yīng)做空白對照,以檢查無菌操作的可靠性。
11.吸取菌液時(shí),必須用吸耳球吸取,切勿直接用口接觸吸管。
12.接種針每次使用前后,必須通過火焰灼燒滅菌,待冷卻后,方可接種培養(yǎng)物。
13.帶有菌液的吸管,試管,培養(yǎng)皿于高壓蒸汽滅菌鍋121℃保持20min后取出清洗。
14.如有菌液灑在桌上或地上,應(yīng)立即用75%酒精溶液覆在被污染處至少30分鐘,再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時(shí),應(yīng)立即脫去,高壓蒸汽滅菌后洗滌。
15.凡帶有活菌的物品,必須經(jīng)消毒后,才能在水龍頭下沖洗,嚴(yán)禁污染下水道。
16.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺開啟的狀態(tài)下,取內(nèi)徑90mm的無菌培養(yǎng)皿若干,無菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15mL,放至凝固后,倒置于30~35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí),證明無菌后,取平板3~5個,分別放置工作位置的左中右等處,開蓋暴露30分鐘后,倒置于30~35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí),取出檢查。100級潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過1個菌落,10000級潔凈室平均不得超過3個菌落。如超過限度,應(yīng)對微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行徹底消毒,直至重復(fù)檢查合乎要求為止。