一、用途

葡萄球菌乳膠凝集檢測(cè)試劑用于確證鑒定平板上分離出的可疑金黃色葡萄球菌菌落。該試劑盒僅供專業(yè)人員使用。

二、原理

乳膠顆粒表面包被有纖維蛋白原（與凝固酶相結(jié)合）和免疫球蛋白（與A蛋白相結(jié)合）。與金黃色葡萄球菌菌懸液混合后，乳膠顆�？裳杆倌�集。缺少凝固酶/A蛋白的葡萄球菌不會(huì)發(fā)生明顯凝集。

三、試劑盒組成成分　

　　　　　　　　　　    M43　　      M433　　　

REAG TEST 測(cè)試試劑　M43a 葡萄球菌乳膠試劑　5mL　　      5×5mL

乳膠顆粒包被有人類纖維蛋白原和免疫球。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（藍(lán)色瓶蓋）

CONTROL +  陽(yáng)性對(duì)照試劑　M43b　陽(yáng)性對(duì)照　　1mL　　　　　2×1mL

無(wú)活性的金黃色葡萄球菌，含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（黑色瓶蓋）

使用說(shuō)明書

檢測(cè)板

攪拌棒

需要的其它材料

l  接種環(huán)

四、警告和注意事項(xiàng)

安全：

1、試劑僅供體外診斷使用。

2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物�？捎么罅克疀_洗以避免疊氮化物的堆積。

3、使乳膠試劑敏感的免疫球蛋白和纖維蛋白原從人類血漿中提取，經(jīng)測(cè)試不含HIV-1, HIV-2、HCV 和 HbsAg抗體。但在使用過(guò)程中，依然應(yīng)遵循潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序。

4、在處理或檢測(cè)可疑致病菌時(shí)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應(yīng)作中和處理。

5、陽(yáng)性對(duì)照液在生產(chǎn)中已作惰性處理，但在使用過(guò)程中依然應(yīng)遵循潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序。

檢測(cè)過(guò)程：

1、試劑盒應(yīng)按說(shuō)明書使用。

2、所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。

3、不要稀釋試劑盒內(nèi)的任何試劑。

4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。

5、不要冷凍試劑盒內(nèi)的試劑。

6、不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到陽(yáng)性對(duì)照試劑或細(xì)菌樣品。

7、注意凝集狀態(tài)，呈凝乳狀或纖維狀可能為非真實(shí)凝集。

8、使用前應(yīng)確保檢測(cè)板清潔干燥。

五、貯存及保質(zhì)期

檢測(cè)試劑盒不使用時(shí)應(yīng)貯存在2～8℃，并應(yīng)在包裝盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用檢測(cè)試劑。

六、樣本

初步分離平板，如5%的血平板，經(jīng)35～37℃培養(yǎng)18～24小時(shí)后，選取1～2個(gè)金黃色葡萄球菌的可疑菌落，菌落應(yīng)作純度測(cè)試，以減少造成錯(cuò)誤的可能性。必要時(shí)，可在另一平板中劃線純化菌落。菌落形態(tài)不典型時(shí)，可作革蘭氏染色以提高測(cè)試菌落為葡萄球菌的可能性。

七、檢測(cè)過(guò)程

質(zhì)量控制：

在每次使用檢測(cè)試劑盒前應(yīng)作下列質(zhì)量控制檢測(cè)，以確證試劑的有效性。

1、陽(yáng)性對(duì)照的控制：滴1滴陽(yáng)性對(duì)照試劑(M43b)于一個(gè)測(cè)試反應(yīng)環(huán)內(nèi)，然后輕輕搖勻測(cè)試試劑(M43a)，并滴1滴測(cè)試試劑于同一個(gè)測(cè)試反應(yīng)環(huán)內(nèi)，不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到陽(yáng)性對(duì)照試劑。用攪拌棒在整個(gè)區(qū)域內(nèi)混勻液體，輕搖檢測(cè)板2分鐘后，應(yīng)觀察到凝集現(xiàn)象。如果未出現(xiàn)凝集反應(yīng)，應(yīng)采用新鮮的檢測(cè)試劑盒。

2、陰性控制：滴1滴混勻的測(cè)試試劑(M43a)于反應(yīng)環(huán)內(nèi)，取新鮮的已知的缺少凝固酶/A蛋白的葡萄球菌(如表皮葡萄球菌)培養(yǎng)18～24小時(shí)的單菌落，與反應(yīng)環(huán)內(nèi)的乳膠試劑混勻。搖動(dòng)檢測(cè)板2分鐘，應(yīng)無(wú)凝集發(fā)生。

測(cè)試程序：

1、輕輕搖勻乳膠測(cè)試試劑，滴1滴測(cè)試試劑于檢測(cè)板的一個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

2、用接種環(huán)從選擇性分離平板上挑取可疑菌落，與反應(yīng)環(huán)內(nèi)的乳膠試劑混合并混勻。用1支干凈的攪拌棒將混勻液在整個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)涂布均勻。

3、輕搖檢測(cè)板，在2分鐘內(nèi)觀察凝集結(jié)果。

4、記錄結(jié)果后，將攪拌棒和檢測(cè)板進(jìn)行適當(dāng)?shù)南�毒處理�?/span>

八、結(jié)果說(shuō)明

在2分鐘內(nèi)出現(xiàn)凝集，表明測(cè)試菌落為金黃色葡萄球菌，如不出現(xiàn)凝集，表明測(cè)試菌落即不是金黃色葡萄球菌，也不是其它具有凝固酶/A蛋白的葡萄球菌。

九、使用的局限性

1、結(jié)果應(yīng)依據(jù)所有的臨床或?qū)嶒?yàn)室信息進(jìn)行判斷。

2、測(cè)試應(yīng)為純菌落，如果菌落不純，可能造成錯(cuò)誤的結(jié)果。

3、培養(yǎng)超過(guò)30小時(shí)后，可能形成自凝。

4、高鹽培養(yǎng)基，如甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基，可抑制A蛋白的產(chǎn)生，可造成假陰性結(jié)果。

5、葡萄球菌的粗糙菌株可引起假陽(yáng)性結(jié)果。這類菌株較少見(jiàn)，并且可從菌落形態(tài)上加以區(qū)別。如果可疑時(shí)，可用生理鹽水制成菌懸液并仔細(xì)觀察菌懸液的流暢性。

6、纖維狀凝集可能為假陽(yáng)性結(jié)果，應(yīng)作進(jìn)一步的生化鑒定。

7、有些酵母菌株可能引起假陽(yáng)性凝集結(jié)果。

8、所有凝固酶陽(yáng)性的葡萄球菌菌株可與葡萄球菌乳膠試劑反應(yīng)。因此金黃色葡萄球菌不易與中間葡萄球菌和豬葡萄球菌區(qū)分開。但這兩種菌株很少?gòu)娜祟惙蛛x出，一般在動(dòng)物或腐生生物中存在。

9、乳膠凝集檢測(cè)為初步鑒定結(jié)果，所有的陽(yáng)性結(jié)果的純培養(yǎng)物應(yīng)作進(jìn)一步的生化鑒定分析。

十、檢測(cè)效果對(duì)比

HKM^® 葡萄球菌乳膠試劑盒與一種已廣泛使用的商業(yè)化的乳膠試劑盒檢測(cè)效果對(duì)比，用二種商品檢測(cè)121株金黃色葡萄球菌和其它葡萄球菌及56株潛在交叉反應(yīng)的菌株。

靈敏度　63/63＝100%

特異性　114/114＝100%

一致性　177/177＝100%

^＊63株分離菌株中，9株在2種試劑盒均存在交叉反應(yīng)。它們分別為：差異檸檬酸桿菌1株、鮑氏不動(dòng)桿菌2株、斯氏普羅威登氏菌1株、蠟樣芽孢桿菌2株、產(chǎn)酸克雷伯1株、鏈球菌1株。以上所有交叉反應(yīng)的菌株中，均不會(huì)在葡萄球菌選擇性分離平板上生長(zhǎng)或生長(zhǎng)時(shí)菌落不會(huì)呈現(xiàn)典型的葡萄球菌菌落形態(tài)。蠟樣芽孢桿菌凝集時(shí)為非典型凝集(呈纖維狀)。

十一、重復(fù)性

批內(nèi)重復(fù)性：通過(guò)以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對(duì)照抗原及一組細(xì)菌樣品對(duì)同1批產(chǎn)品的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測(cè)。由不同的操作者隨機(jī)測(cè)試3次，最終效價(jià)由參照/對(duì)照抗原測(cè)定，并且3次定性分析結(jié)果完全一致。