一.發(fā)展簡史
1947年美國科學(xué)家?guī)鞝柼?W.H.Coulter)發(fā)明了用電阻法計數(shù)粒子的專利技術(shù)。1956年他又將這一技術(shù)應(yīng)用于血細胞計數(shù)獲得成功,其原理是根據(jù)血細胞非傳導(dǎo)的性質(zhì),以電解質(zhì)溶液中懸浮血細胞在通過計數(shù)小孔時引起的電阻變化進行檢測為基礎(chǔ),進行血細胞計數(shù)和體積測定,這種方法稱為電阻法或庫爾特原理。1962年,我國第一臺血細胞計數(shù)儀在上海研制成功。到了60年代未血細胞分析儀除可進行血細胞計數(shù)外,還可以同時測定HGB血紅蛋白。70年代,血小板計數(shù)儀問世。80年代,開發(fā)了白細胞分類(3分類及5分類)。90年代,開發(fā)出了可對網(wǎng)狀紅細胞進行計數(shù)的血細胞分析儀,同時5分類及幼稚細胞檢測更成熟,并發(fā)展成為血細胞分析流水線。
二.如何選購血細胞分析儀
當(dāng)前,在我國境內(nèi)銷售的的血細胞分析儀品牌很多,給醫(yī)院的選購造成了一定的麻煩。如日本SYSMEX公司(東亞醫(yī)用電子株式會社)的血細胞分析儀系列、美國庫爾特公司(現(xiàn)已被貝克曼收購)的血細胞分析儀系列、日本光電公司的血細胞分析儀系列、美國丹能公司以及瑞典博爾醫(yī)療公司的血細胞分析儀系列。因此建議醫(yī)院購買時從以下幾個角度考慮:
1.實用性。醫(yī)院應(yīng)該根據(jù)自身的能力和標(biāo)本量來決定購買何種檔次的機器,不要盲目攀比,爭相購買高檔機器,從而造成儀器購置的浪費。
2.儀器性能。這是最關(guān)鍵的一個因素。不能完全相信廠家的宣傳,要多聽取專家意見和到友鄰單位了解。
3.價格比。衡量同檔次機器的價格。
4.售后服務(wù)。俗話說:救人如救火。對機器也是一樣,機器損壞待修時間過長會造成病人對醫(yī)院的信譽度下降,久而久之就會造成病人的流失。所以,機器的售后服務(wù)也是一個必須考慮的因素。
5.輔助設(shè)備、試劑、消耗品和零配件價格。
要建立請專家進行論證的制度,糾正過去由院長一人說了算的錯誤做法。
三.如何驗收血細胞分析儀
1.驗收前準(zhǔn)備工作:仔細閱讀說明書;按說明書要求準(zhǔn)備儀器的工作環(huán)境和相關(guān)的外部設(shè)備;成立驗收小組;擬定驗收計劃。
2.開箱:必要時請商檢局派人參加;開箱后按照裝箱單清點物品是否和裝箱單一致。
3.安裝:應(yīng)該對安裝過程進行詳細的記錄。
4.驗收儀器的技術(shù)性能指標(biāo)
(1)測定儀器試劑的本底;
(2)檢測儀器的精密度:用高、中、低值新鮮血標(biāo)本各測10次,計算X-S、 CV值,取20~30個標(biāo)本隨機排列,各測3次,求出總重復(fù)性CV%,它代表批內(nèi)精度、儀器穩(wěn)定性、互染等因素的總和;
(3)互染率:取高、低兩個濃度全血(高、低值相差4~5倍),先測定高濃度3次,接著測低濃度3次,再測高濃度3次,計算高對低、低對高的互染率;
(4)線性:取全血標(biāo)本,用鹽水稀釋相當(dāng)于全血的90%、80%、70%……,測得RBC、WBC、HGB結(jié)果做y=a bx,a接近于0,b接近于1;
(5)校準(zhǔn):應(yīng)由廠家提供全血校準(zhǔn)物(低檔儀器用校準(zhǔn)顆粒及HGB校準(zhǔn)液)進行校準(zhǔn);
(6)上述指標(biāo)必須符合該儀器的出廠指標(biāo),才算驗收合格。由驗收小組成員、安裝工程師及設(shè)備科同志簽字后存檔。
四.如何對血細胞分析儀進行校準(zhǔn)
儀器經(jīng)使用一個階段后應(yīng)該作一次全面的校準(zhǔn),因為儀器本身是個比較器。一旦儀器產(chǎn)生漂移將帶來分析誤差及不精密度,所以儀器應(yīng)該經(jīng)常定期校準(zhǔn)。
1.儀器校準(zhǔn)前準(zhǔn)備:徹底清洗管道,去除管道中的殘留血液、吸附的蛋白和纖維等,然后測定試劑空白,本底必須符合要求。
2.校準(zhǔn)物準(zhǔn)備:檢查校準(zhǔn)物是否在有效期內(nèi),外觀有無變質(zhì)。從冰箱中取出后,必須平衡至室溫,輕輕混勻,小心打開瓶蓋,勿使血液濺出,分裝成兩瓶。
3.在儀器上測定校準(zhǔn)物,連續(xù)測定11次。第1次結(jié)果棄置不用,將2至11次結(jié)果計算 出 X S,絕對誤差,相對誤差。
4.核對實測結(jié)果與校準(zhǔn)物所示結(jié)果,檢查實測結(jié)果有無升高或下降的趨向性。
5.判斷校準(zhǔn)結(jié)果:校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)要求如下表1。(1)如果各參數(shù)的絕對值誤差和相對誤差小于一級要求,屬合格范圍,不須作任何校準(zhǔn)。(2)如果參數(shù)大于一級要求,小于二級要求,可按說明書要求調(diào)整系數(shù)。當(dāng)調(diào)整后,可再測定另一瓶全血標(biāo)準(zhǔn)物,理應(yīng)達到小于一級要求水平。(3)如果結(jié)果大于二級要求,則需通知廠家派工程師修理或調(diào)整,為保證病人標(biāo)本測試質(zhì)量,該儀器應(yīng)暫停使用。
表1 校 準(zhǔn) 標(biāo) 準(zhǔn) 要 求
絕對誤差
|
相對誤差
|
|||
一級要求
|
二級要求
|
一級要求
|
二級要求
|
|
WBC
|
0.1×109/l
|
0.4×109/l
|
1.25%
|
5%
|
RBC
|
0.03×1012/l
|
0.08×1012/l
|
0.7%
|
8.0%
|
HGB
|
1g/l
|
8g/l
|
0.78%
|
3.0%
|
HCT
|
0.8%
|
1.7%
|
2.0%
|
4.5%
|
MCV
|
1.0fl
|
8.0fl
|
1.18%
|
2.5%
|
PLT
|
6.0×109/l
|
20.0×109/l
|
2.7%
|
9.0%
|
MPV
|
0.50fl
|
8.0fl
|
5%
|
20%
|
五.使用血細胞分析儀的注意事項
為了保證使用血細胞分析儀得出的結(jié)果能夠盡量反映病人的真實情況,在使用時必須注意以下幾方面:
1.血樣:由于靜脈血受外界因素影響較小,成份比較穩(wěn)定,檢測結(jié)果準(zhǔn)確度高重復(fù)性好,因此除嬰兒外,建議取血者均應(yīng)采用靜脈血。如果采集未梢血時,注意不可局部過度擠壓,避免血液中混入大量的組織液,而且易激活凝血系統(tǒng)產(chǎn)生局部凝血,導(dǎo)致檢測結(jié)果的誤差;第一滴血由于細胞成分不穩(wěn)定應(yīng)棄掉,用第二滴血進行檢測。
2.抗凝:使用拘櫞酸鹽抗凝劑時間過長易結(jié)晶,細胞形態(tài)易發(fā)生變化,影響計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性;草酸鹽易使血小板產(chǎn)生凝集,并可使白細胞形態(tài)發(fā)生變化,影響計數(shù)結(jié)果及分類;而肝素抗凝過量易引起白細胞凝集和血小板減少;EDTA-2Na較EDTA-2K的可溶性低,血小板凝集的可能性大。因此國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(ICSH)1993年發(fā)表的文件中建議使用EDTA-2K作為血細胞分析儀的抗凝劑,用量為1.5~2.2mg/ml血。
3.采血后用塞子密閉,室溫保存不超過6小時。
4.稀釋:稀釋器、吸樣管要經(jīng)過校準(zhǔn)。吸血后吸樣管外的血液要完全擦干凈。血液稀釋后要盡快測定,否則易引起“稀釋性溶血”。
5.混勻:檢測前混勻很重要,如果無旋轉(zhuǎn)式混勻器應(yīng)顛倒混勻至少8次。
6.試劑:血細胞分析儀對試劑的要求非常嚴格,要求有嚴格的滲透壓標(biāo)準(zhǔn)、穩(wěn)定的導(dǎo)電率、高標(biāo)準(zhǔn)的純凈度以及對儀器管道和閥路無腐蝕作用。因此溶血劑、稀釋液及清洗劑等最好選用原廠配套產(chǎn)品。
7.白細胞分類:首先必須明確,迄今為止,世界上無論多先進的血細胞分析儀,進行的白細胞分類都只是一種過篩手段,并不能完全取代人工鏡檢分類。要堅決糾正有些單位用了血細胞分析儀就丟掉鏡檢的錯誤思想。
8.質(zhì)量控制:血液分析必須建立嚴格的質(zhì)量控制制度,才能保證結(jié)果的可靠性。
六.現(xiàn)代血細胞分析儀的主要進展
隨著高科技的引用和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的發(fā)展,各種先進的血細胞分析測試技術(shù)被應(yīng)用到血細胞分析儀上。1987年Coulter公司發(fā)明的VCS(Volume,V,體積;Conductivity,C,電導(dǎo)性;Scatter,S,光散射)技術(shù)可使血細胞未經(jīng)任何處理,在與體內(nèi)形態(tài)完全相同的自然狀態(tài)下得出檢測結(jié)果。而在SYSMEX的NE-8000和SF-3000血細胞分析儀中采用了阻抗和射頻技術(shù)聯(lián)合的白細胞分類法。進入90年代后,儀器的自動化程度增高(達到120份/小時);可進行多參數(shù)分析(高達30余項);精密度高(重復(fù)計數(shù);保證微孔管清潔;取中段血;運動流式細胞計數(shù)原理;鞘流原理……);向5分類及鑒別幼稚細胞發(fā)展;準(zhǔn)確度好,全面質(zhì)量管理,保證儀器檢測可靠性;具有智能化,可對同一病人診斷的前后進行對比,提出綜合意見,確定診斷方向;更加注意保護操作人員的安全(SLS-Hb、自動混勻、進樣、吸樣針內(nèi)外清洗等);向流水線發(fā)展,將血細胞分析儀、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)儀、推片、染色機聯(lián)成流水操作線。
最后,再強調(diào)一下,堅決反對用了血細胞分析儀后就不進行鏡下復(fù)檢和分類的錯誤傾向。