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交叉電泳技術(shù)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

(一)原理
交叉免疫電泳是把瓊脂平板電泳和火箭電泳結(jié)合起來的一種方法。先將抗原樣品在瓊脂凝膠中進(jìn)行電泳分離,然后使已分開的各抗原成分與原泳動(dòng)方向呈90度角的方向泳向含抗體的瓊脂凝膠中,于是該抗原樣品中的各個(gè)抗原成分和它相對(duì)應(yīng)的抗體依次形成若干錐形沉淀線,根據(jù)沉淀線的位置及面積(或高度)可確定該抗原的質(zhì)和量。
此試驗(yàn)可以用來鑒定抗原,即與標(biāo)準(zhǔn)抗原抗體系統(tǒng)相比較,就可知待測(cè)樣品中抗原的質(zhì)和量。此法也可以鑒定抗體,把未知的含抗體的樣品與標(biāo)準(zhǔn)抗原反應(yīng),所得的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)的抗原、抗體反應(yīng)結(jié)果比較,從而可以確定其中所含抗體成分及其滴度。
(二)試劑及材料
1.巴比妥緩沖液 0.05mol/L pH8.2。
2.1%瓊脂糖或優(yōu)質(zhì)瓊脂 以巴比妥緩沖液配制。
3.pH7.2 PBS液
4.抗原
5.抗體
6.電泳儀、玻板、吸管、滴管等。
(三)操作方法
1.取10cm×10cm的潔凈玻板,加1%溶化瓊脂糖10ml,鋪勻、冷凝。
2.打孔,在距陰極端2cm,玻板邊2.2cm處,打孔。
3.將一定濃度的抗原加入孔內(nèi),將抗原孔置于負(fù)極,電泳。電壓10V/cm,泳動(dòng)1h。
4.電泳結(jié)束后,切除非抗原電泳部分的瓊脂(約6cm×10cm)。
5.取上述1%溶化的瓊脂糖10ml放入60℃水浴中,加入預(yù)熱的適當(dāng)濃度的血清抗體
迅速混勻,鋪入切去的瓊脂部分。冷卻后,用不含抗體瓊脂密封切口。
6.將玻板與原電泳方向成90度角放置,使泳動(dòng)后的抗原凝膠置于負(fù)極,電泳。電壓為3V/cm,泳動(dòng)10h~20h。
7.漂洗、染色、脫色、烘干。
(四)結(jié)果判定
與標(biāo)準(zhǔn)抗原抗體錐形沉淀線比較,判定和分析結(jié)果。
(五)注意事項(xiàng)
1.抗原抗體的最適稀釋度必須事先摸索好。
2.第二次電泳時(shí)間的長(zhǎng)短以觀察錐形沉淀線的出現(xiàn)為準(zhǔn)。電泳時(shí)間長(zhǎng)短不一,短的可2h即出現(xiàn)。

 
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