GB/T 5750.2-2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法 水樣的采集和保存

GB/T 5750.12-2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法 微生物指標(biāo)

本文主要包含

1.生活飲用水中的微生物指標(biāo)

2.水樣采集規(guī)則及注意事項

3.菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌的測定方法

4.對所檢測水樣的綜合分析

生活飲用水中的微生物指標(biāo)

菌落總數(shù)

水樣在營養(yǎng)瓊脂上有氧環(huán)境下，37℃培養(yǎng)48h后，所得1mL水樣所含菌落的總數(shù)。

檢測意義:作為一般性污染的指標(biāo),即評價被檢樣品的微生物污染程度和安全性。水樣菌落總數(shù)越多,說明水被微生物污染程度越嚴(yán)重,病原微生物存在的可能性越大,但不能說明污染的來源。

總大腸菌群

指一群在37℃培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。

檢測意義:作為糞便污染的指標(biāo)。水樣總大腸菌群的含量,表明水被糞便污染的程度，而且間接地表明有腸道致病菌存在的可能。

耐熱大腸菌群

指一群在44-44.5℃培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。我國習(xí)慣上稱之為“糞大腸菌群”。

微生物指標(biāo)常規(guī)檢驗流程圖

一、水樣采集

采樣原則：所采集的樣品具有代表性。

采樣容器:不能是新的污染源:不吸收或吸附某些待測組分不與待測組分發(fā)生反應(yīng)。保證從采樣到分析期間樣品各組分的濃度不發(fā)生改變。

微生物樣品必須按一般無菌操作的基本要求采集,并保證在運送、貯存過程中不受污染。

自來水水樣:先將自來水龍頭用火焰燒灼3min滅菌再開放水龍頭使水流5min(經(jīng)常用水的水龍頭放水1~3min)后,采集水樣于無菌玻璃瓶,約占瓶容量80%,以便搖勻水樣。

水源水水樣:選有代表性的地點及可疑地方,一般距水面下10-15cm采集，采樣后在水中改好蓋子，再從水中取出。

注意事項

1.嚴(yán)格無菌操作。

2.做好標(biāo)記:采得水樣后應(yīng)立即記錄水樣名稱、地點、時間等內(nèi)容。

3.從速送檢。水樣從采集到檢驗不應(yīng)超過2h,在4℃下保存不應(yīng)超過24h。

二、菌落總數(shù)測定

所需培養(yǎng)基和試劑：營養(yǎng)瓊脂、9mL無菌生理鹽水管。

自來水水樣檢測

操作步驟：

1.以無菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL充分混勻的水樣,注入滅菌平皿中。

2.傾注約15mL已融化井冷卻到45℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,并立即旋搖平皿,使水與培養(yǎng)基充分混勻（每次檢驗時應(yīng)做一平行接種,同時另用一個平只傾注營養(yǎng)瓊脂養(yǎng)基作為空白對照）

3.待冷卻凝固后,翻轉(zhuǎn)平皿,使底面向上,置于36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h,進行菌落計數(shù),即為水樣1mL中的菌落總數(shù)。

4.培養(yǎng)完成后，用眼睛直接觀察,必要時用放大鏡檢查,以防遺漏。

結(jié)果分析與報告:

計算平均菌落數(shù)，若菌落總數(shù)(CFU/mL)當(dāng)檢樣的菌落數(shù)為1~100時,按實有數(shù)報告；大于100時,采用二位有效數(shù)字報告。

國家標(biāo)準(zhǔn)(GB 5749-2006)規(guī)定生活飲用水菌落總數(shù)每毫升不得超過100個。

水源水檢測

操作步驟：

1.以無操作方法吸取1mL充分混勻的水,注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中,混勻成1:10稀釋液。

2.吸取1:10的稀釋液1mL，注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中,混勻成1:100稀師液,按同法依次稀釋成1:1000,1:1000釋液等備用（如此遞增稀釋一次,必須更換一支1m滅菌管）。

3.然后用無菌極管取稀釋的水樣和2個~3個適釋度的水樣1mL,分別注入滅菌平皿內(nèi)。之后操作同自來水水樣的檢驗步驟。

結(jié)果分析與報告:

計算平均菌落數(shù)，首先選擇平均菌落在30~300之間者進行計算。

一般水源水中菌落總數(shù)與水清潔程度的關(guān)系：

注意事項

1.菌落總數(shù)測定中,應(yīng)選擇合適的稀釋度進行(生活飲用水,國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每毫升不得超過100個,因此以直接吸取1毫升到平板進行培養(yǎng))

2.各稀釋管、相應(yīng)半皿做好標(biāo)記。包括:水樣名稱、稀釋度、時間、小組。

3.嚴(yán)格無菌操作進行水樣稀釋時,每一稀釋度均需更換吸管。

4.傾注時,要注意營養(yǎng)瓊脂的溫度。

5.傾入瓊脂后要混勻,待瓊脂凝固后倒置培養(yǎng)。

三、總大腸菌群測定

所需培養(yǎng)基和試劑：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基。

多管發(fā)酵法步驟:

初步發(fā)酵試驗:采用乳糖蛋白培養(yǎng)液36℃±1℃培養(yǎng)24h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。

平板分離:對陽性管培養(yǎng)物,接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基觀察菌落特征,并進行革蘭氏染色和鏡檢。

復(fù)發(fā)酵證實試驗:對典型和可疑菌落,接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液,進行復(fù)發(fā)酵證實試驗。

結(jié)果報告(MPN):根據(jù) GB 5750.12-2006 所附檢索表報告結(jié)果。

四、耐熱大腸菌群測定

所需培養(yǎng)基和試劑：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、EC肉湯、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基

多管發(fā)酵法步驟:

初步發(fā)酵試驗:采用乳糖蛋白培養(yǎng)液36℃±1℃培養(yǎng)24h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。

耐熱培養(yǎng):陽性管接種在EC肉湯管中，44.5℃培養(yǎng)24h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。

平板培養(yǎng):陽性管接種在EMB平板上，36℃±1℃培養(yǎng)24h。

結(jié)果報告(MPN):根據(jù) GB 5750.12-2006 所附檢索表報告結(jié)果。

五、大腸埃希氏菌測定

所需培養(yǎng)基和試劑：EC-MUG培養(yǎng)基

多管發(fā)酵法步驟:

耐熱培養(yǎng):將總大腸菌群初發(fā)酵中產(chǎn)酸或產(chǎn)氣的管進行大腸埃希氏菌檢測，接種此類試管中的液體到EC-MUG管中，在培養(yǎng)箱或恒溫水浴中44.5℃培養(yǎng)24h。如使用恒溫水浴，在接種后30min內(nèi)進行培養(yǎng)，使水浴液面超過EC-MUG管的液面。

結(jié)果報告(MPN):

將培養(yǎng)后的EC-MUG管在暗處用366nm紫外燈照射，如有藍(lán)色熒光，則表明水樣中含有大腸埃希氏菌。

計算EC-MUG陽性管數(shù)，根據(jù)GB 5750.12-2006所附檢索表報告結(jié)果。