希望有助于微生物檢測工作的小伙伴們更好地開展工作。
一、什么是培養(yǎng)基?
培養(yǎng)基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細胞營養(yǎng)和促使細胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。
二、培養(yǎng)基的購置
從培養(yǎng)基自身的質(zhì)量來看,不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品,甚至同一廠家不同批號的產(chǎn)品都會存在差異。依據(jù)ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》,對培養(yǎng)基的供應企業(yè)進行評價后選擇合格的供應商,這是培養(yǎng)基購買過程中重要的步驟。應選擇產(chǎn)品市場信譽度高、有質(zhì)量保證能力和服務保證能力的企業(yè);企業(yè)是否通過了質(zhì)量管理體系的認證是較為客觀的評價指標。
要求生產(chǎn)企業(yè)提供:培養(yǎng)基成分名稱及產(chǎn)品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術(shù)數(shù)據(jù)清單、質(zhì)控證書以及必要的安全/危害數(shù)據(jù)等材料。
三、培養(yǎng)基的驗收
購買的培養(yǎng)基到貨后,應有專人做好接受和驗收工作,應仔細核對生產(chǎn)企業(yè)提供的資料、培養(yǎng)基名稱、規(guī)格數(shù)量、外觀特征、批號、保質(zhì)期是否符合要求。每批培養(yǎng)基到貨后都應對培養(yǎng)基的質(zhì)量進行檢測,滿足檢測方法規(guī)定的要求后方可投入使用。
四、培養(yǎng)基的儲存
干粉培養(yǎng)基應保存在陰涼干燥處,要避免陽光直射;未開瓶的培養(yǎng)基在室溫下的保存期限以廠家提供為準,開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕,應注意防潮并盡快用完。
應定期對儲存中的培養(yǎng)基進行常規(guī)檢查,如容器密閉性復查、首次開封日期、內(nèi)容物的感官檢查,如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。
五、培養(yǎng)基的制備
1.培養(yǎng)基用水
培養(yǎng)基制備用水應使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水,最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。
2.稱量
稱量時要用專用的角匙,避免交叉污染而影響檢驗結(jié)果;干粉培養(yǎng)基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。
3.復水
復水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養(yǎng)基中,影響微生物的生長;容器的大小需大于復水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養(yǎng)基溢出;含有瓊脂粉的培養(yǎng)基,在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘;加熱培養(yǎng)基時一定要進行攪拌,特別是瓊脂類培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出,對于少量的培養(yǎng)基最好使用沸水浴進行加熱。
燒糊的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)被破壞,并可產(chǎn)生有毒物質(zhì),如發(fā)現(xiàn)焦化,或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出,該培養(yǎng)基即不能使用,應重新制備。對于瓊脂類培養(yǎng)基進行再融化時應使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱,最多只能加熱兩次,第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應棄去。
4.滅菌
一般培養(yǎng)基采用濕熱滅菌,即高壓蒸汽滅菌,通常是121℃、15min,含糖或特殊培養(yǎng)基,按照國家標準或生產(chǎn)商提供的說明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌,避免微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分,改變培養(yǎng)基的酸堿度。
高溫可破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分,還會使瓊脂的凝膠強度下降,因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間,并且不可重復滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進行檢定,并定期采用生物指示菌法或化學變色紙片對滅菌效果進行驗證。
5.pH測定
微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性。培養(yǎng)基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH 值,即培養(yǎng)基使用前的pH,并應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量,固體瓊脂培養(yǎng)基應以特殊的膠體表面測量電極進行測量。使用過程中,如果需要調(diào)整培養(yǎng)基的pH,應用1mol/L Na0H或1mol/L HCL調(diào)整,注意不可反復調(diào)pH,否則會影響培養(yǎng)基的滲透壓。
6.配制好的培養(yǎng)基保存
滅菌以后培養(yǎng)基應該迅速冷卻至所需溫度,避免長時間保存在滅菌鍋內(nèi),造成過度滅菌,影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。
所配制的培養(yǎng)基的量,應該是在最長保存期限內(nèi)正好使用完。含染料的培養(yǎng)基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完,應于冷藏保存,如果保存時間超過2天,應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時間超過2個星期,應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。