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摘要:
微生物的檢測(cè),無論在理論研究還是在生產(chǎn)實(shí)踐中都具有重要的意義,本文分生長(zhǎng)量測(cè)定法,微生物計(jì)數(shù)法,生理指標(biāo)法和商業(yè)化快速微生物檢測(cè)簡(jiǎn)要介紹了利用微生物重量,體積,大小,生理代謝物等指標(biāo)的二十余種常用的檢測(cè)方法,簡(jiǎn)要介紹了這些方法的原理,應(yīng)用范圍和優(yōu)缺點(diǎn).
概述:
一個(gè)微生物細(xì)胞在合適的外界條件下,不斷的吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),并按自己的代謝方式進(jìn)行新陳代謝.如果同化作用的速度超過了異化作用,則其原生質(zhì)的總量(重量,體積,大小)就不斷增加,于是出現(xiàn)了個(gè)體的生長(zhǎng)現(xiàn)象.如果這是一種平衡生長(zhǎng),即各細(xì)胞組分是按恰當(dāng)?shù)谋壤鲩L(zhǎng)時(shí),則達(dá)到一定程度后就會(huì)發(fā)生繁殖, 從而引起個(gè)體數(shù)目的增加,這時(shí),原有的個(gè)體已經(jīng)發(fā)展成一個(gè)群體.隨著群體中各個(gè)個(gè)體的進(jìn)一步生長(zhǎng),就引起了這一群體的生長(zhǎng),這可從其體積、重量、密度或濃度作指標(biāo)來衡量.
微生物的生長(zhǎng)不同于其他生物的生長(zhǎng),微生物的個(gè)體生長(zhǎng)在科研上有一定困難,通常情況下也沒有實(shí)際意義.微生物是以量取勝的,因此,微生物的生長(zhǎng)通常指群體的擴(kuò)增.微生物的生長(zhǎng)繁殖是其在內(nèi)外各種環(huán)境因素相互作用下的綜合反映.因此生長(zhǎng)繁殖情況就可作為研究各種生理生化和遺傳等問題的重要指標(biāo),同時(shí),微生物在生產(chǎn)實(shí)踐上的各種應(yīng)用或是對(duì)致病,霉腐微生物的防治都和他們的生長(zhǎng)抑制緊密相關(guān).所以有必要介紹一下微生物生長(zhǎng)情況的檢測(cè)方法.既然生長(zhǎng)意味著原生質(zhì)含量的增加,所以測(cè)定的方法也都直接或間接的以次為根據(jù),而測(cè)定繁殖則都要建立在計(jì)數(shù)這一基礎(chǔ)上.微生物生長(zhǎng)的衡量,可以從其重量,體積,密度,濃度,做指標(biāo)來進(jìn)行衡量.
生長(zhǎng)量測(cè)定法:
1、 體積測(cè)量法:又稱測(cè)菌絲濃度法
通過測(cè)定一定體積培養(yǎng)液中所含菌絲的量來反映微生物的生長(zhǎng)狀況.方法是,取一定量的待測(cè)培養(yǎng)液(如10毫升)放在有刻度的離心管中,設(shè)定一定的離心時(shí)間(如5分鐘)和轉(zhuǎn)速(如5000 rpm),離心后,倒出上清夜,測(cè)出上清夜體積為v,則菌絲濃度為(10-v)/10.菌絲濃度測(cè)定法是大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長(zhǎng)的一個(gè)重要監(jiān)測(cè)指標(biāo).這種方法比較粗放,簡(jiǎn)便,快速,但需要設(shè)定一致的處理?xiàng)l件,否則偏差很大,由于離心沉淀物中夾雜有一些固體營(yíng)養(yǎng)物,結(jié)果會(huì)有一定偏差.
2、 稱干重發(fā)法
可用離心或過濾法測(cè)定.一般干重為濕重的10-20%.在離心法中,將一定體積待測(cè)培養(yǎng)液倒入離心管中,設(shè)定一定的離心時(shí)間和轉(zhuǎn)速,進(jìn)行離心,并用清水離心洗滌1-5次,進(jìn)行干燥.干燥可用烘箱在1050C或1000C下烘干,或采用紅外線烘干,也可在800℃或400℃下真空干燥,干燥后稱重.如用過濾法,絲狀真菌可用濾紙過濾,細(xì)菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾,過濾后用少量水洗滌,在400℃下進(jìn)行真空干燥.稱干重發(fā)法較為煩瑣,通常獲取的微生物 產(chǎn)品為菌體時(shí),常采用這種方法,如活性干酵母(activity dry yeast, ADY),一些以微生物菌體為活性物質(zhì)的飼料和肥料.
3、 比濁法
微生物的生長(zhǎng)引起培養(yǎng)物混濁度的增高.通過紫外分光光度計(jì)測(cè)定一定波長(zhǎng)下的吸光值,判斷微生物的生長(zhǎng)狀況.對(duì)某一培養(yǎng)物內(nèi)的菌體生長(zhǎng)作定時(shí)跟蹤時(shí),可采用一種特制的有側(cè)臂的三角燒瓶.將側(cè)臂插入光電比色計(jì)的比色座孔中,即可隨時(shí)測(cè)定其生長(zhǎng)情況,而不必取菌液.該法主要用于發(fā)酵工業(yè)菌體生長(zhǎng)監(jiān)測(cè).如我 所使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計(jì),在波長(zhǎng)600nm 處用比色管定時(shí)測(cè)定發(fā)酵液的吸光光度值OD600,以此監(jiān)控E.Coli的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)時(shí)間.
4、 菌絲長(zhǎng)度測(cè)量法
對(duì)于絲狀真菌和一些放線菌,可以在培養(yǎng)基上測(cè)定一定時(shí)間內(nèi)菌絲生長(zhǎng)的長(zhǎng)度,或是利用一只一端開口并帶有刻度的細(xì)玻璃管,到入合適的培養(yǎng)基,臥放,在開口的一端接種微生物,一段時(shí)間后記錄其菌絲生長(zhǎng)長(zhǎng)度,借此衡量絲狀微生物的生長(zhǎng).
